宿主細胞蛋白（HCPs）對重組蛋白藥物的穩(wěn)定性、安全性和療效具有負面影響。因此，確保最終藥物的純度和純化工藝的一致性至關重要，需使用合格且具有廣泛反應的HCP ELISA試劑盒。HCP ELISA檢測試劑盒必須滿足兩個標準，即具有廣泛的反應性，并且通過方法學驗證。Cygnus HCP ELISA試劑盒是行業(yè)的金標準，以下內容詳細介紹了Cygnus HCP ELISA試劑盒的正確實驗操作與方法學驗證流程，幫您高效掌握實驗關鍵。

正確的洗板操作對于降低ELISA實驗中的變異和消除背景干擾至關重要。如果您正在使用自動化洗板設備或實驗結果的變異程度高于預期，希望以下文章能幫助您優(yōu)化實驗流程，確保實驗結果回歸正常。

如何用正確的洗板方法解決ELISA檢測結果漂移的問題？

HCP ELISA檢測方法必須要通過法規(guī)認可的實驗方法（ICH或FDA指南等）進行方法學驗證，以確保其能夠產生準確的結果。想要獲得準確的HCP ELISA檢測結果，本質上是要保證樣品中HCP的濃度高于試劑盒的定量下限（LOQ），同時HCP的檢測抗體還要處于過剩狀態(tài)，滿足這兩點就必須要對檢測樣品（過程樣品和最終的藥物原液）進行稀釋線性驗證。因此，稀釋線性（dilution linearity）是驗證HCP ELISA方法特異性和準確性的關鍵實驗之一。

HCP ELISA方法驗證——稀釋線性dilution linearity

在ELISA試劑盒的使用過程中，確保結果的準確性至關重要。為了有效識別樣品配方與試劑盒組分之間的兼容性，加標回收這一關鍵驗證試驗顯得尤為重要。它不僅是評估ELISA試劑盒準確性的重要工具，也是滿足法規(guī)和藥典（如ICH或FDA指南等）對商品化ELISA試劑盒方法學驗證要求的可靠方式。

HCP ELISA方法驗證——加標回收（Spike & Recovery）

空白對照是指在實驗設計中設置的一種陰性對照，旨在監(jiān)測非特異性背景信號，并為基線吸光度值提供參考。在酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）中，通過引入空白對照，可以有效識別并扣除樣品讀數(shù)中的背景噪聲，從而提高檢測結果的準確性。然而，在多分析物ELISA測定中，由于其固有的高背景信號特性，這種標準化方法可能并不適用。下文將詳細探討為何在Cygnus的ELISA測定中通常不建議使用空白對照。

使用Cygnus ELISA試劑盒該如何設置空白對照？

ELISA是各國藥典推薦的在生物制品中檢測殘留HCPs的方法，可以測定HCPs的總量。并且ELISA的操作簡便，是經(jīng)典的免疫學檢測方法。但ELISA檢測HCPs也有方法的局限性，比如不能從ELISA的結果中知道樣品中有哪些HCPs，或者用于檢測的抗體與哪些HCPs發(fā)生了免疫反應。因此，監(jiān)管部門要求在使用ELISA檢測過程中HCPs殘留含量時，不僅要通過方法學驗證證明試劑盒的準確度，精密度，靈敏度等，而且還需要證明使用的HCPs抗體有廣泛的反應性，即HCPs抗體覆蓋率。通過AAE-MS方法來識別最終藥物中的高風險HCPs信息，進而確保這些HCPs能夠被檢測到。在完成以上所有方法學驗證步驟后，該免疫檢測方法就可用于過程樣品監(jiān)控和產品的批次放行。這個決策流程對于開發(fā)和驗證通用型或工藝專屬型HCP ELISA方法很有幫助，它展示了如何將正交AAE和MS方法相結合，通過數(shù)據(jù)來決定哪種類型的檢測方法更適用于您的項目。

抗體親和提取(AAE?)：革新宿主細胞蛋白(HCPs)分析的新篇章